ATCC細(xì)胞實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程

　　1.先準(zhǔn)備好細(xì)胞培養(yǎng)皿或細(xì)胞培養(yǎng)瓶，及產(chǎn)品說(shuō)明推薦的相應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)基。并在37℃水浴中預(yù)先溫?zé)峒?xì)胞培養(yǎng)基。

　　2.小心取出裝有細(xì)胞的凍存管，保持管蓋擰緊，將凍存管蓋以下的部分置于37℃水浴中并輕微的攪拌以幫助解凍。解凍過(guò)程應(yīng)該盡快，

大約短于2分鐘或待最后一塊小冰晶體剛?cè)诨?，就?yīng)將細(xì)胞凍存管取出水浴。

　　3.在從水浴中取出的細(xì)胞凍存管表面噴灑70%乙醇配制的消毒劑，用無(wú)菌紙巾或紗布試干。之后的操作步驟都應(yīng)該遵循在無(wú)菌條件下

生物安全柜中嚴(yán)格操作。

　　4.小心擰開(kāi)凍存管的頂部，將管內(nèi)容物用1ml移液槍轉(zhuǎn)移到含9毫升培養(yǎng)基的無(wú)菌離心管中。離心5到7分鐘(125×g),小心吸去上清液以

去除抗凍劑(二甲基亞砜)，避免丟失細(xì)胞沉淀。將細(xì)胞沉淀重懸于配好的培養(yǎng)基中。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)容器，輕輕搖晃使細(xì)胞均勻的

分布。生長(zhǎng)較慢的細(xì)胞株可重懸于5-8ml培養(yǎng)基并轉(zhuǎn)移到T25培養(yǎng)瓶。生長(zhǎng)較快的細(xì)胞株可重懸于12-20ml培養(yǎng)基并轉(zhuǎn)移到T75培養(yǎng)瓶。

ATCC網(wǎng)站有各個(gè)細(xì)胞株的具體生長(zhǎng)狀況及培養(yǎng)方法記載。

　　5.將細(xì)胞培養(yǎng)容器置于細(xì)胞培養(yǎng)箱，在溫度37℃,二氧化碳濃度5%的培養(yǎng)條件下進(jìn)行孵育。細(xì)胞培養(yǎng)24小時(shí)后應(yīng)在顯微鏡下觀察細(xì)胞

形態(tài)和生長(zhǎng)狀況。

　　為了確保細(xì)胞活力、遺傳基因型穩(wěn)定和表型的穩(wěn)定，細(xì)胞株的培養(yǎng)需要保持在對(duì)數(shù)期。這意味著需要定期對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代。

并且注意在細(xì)胞進(jìn)入生長(zhǎng)平臺(tái)期之前，即單層細(xì)胞100%匯合長(zhǎng)滿前或懸浮細(xì)胞達(dá)到其推薦的最大細(xì)胞密度之前，要進(jìn)行細(xì)胞傳代。

監(jiān)測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)和繪制每個(gè)細(xì)胞株的生長(zhǎng)曲線都有助于確定細(xì)胞株的生長(zhǎng)特性。